El medio de cultivo se clasifica según su uso
Según los diferentes usos, el medio de cultivo se puede dividir en medio de cultivo básico, medio de cultivo de nutrientes, medio de cultivo de enriquecimiento, medio de cultivo selectivo, medio de cultivo de identificación, medio de cultivo anaeróbico, etc.
1. Los medios básicos son la base nutricional que normalmente necesitan la mayoría de los microorganismos. Si un microorganismo tiene necesidades especiales, puede agregar algunos ingredientes sobre esta base, como agua de peptona, medio de cultivo de caldo, agar nutritivo, etc. El medio de agua con peptona al 1% es el medio básico más simple. Este medio básico se puede utilizar para el cultivo general de enriquecimiento bacteriano y la prueba de sustrato índigo. Si se agregan indicadores y azúcares, se preparará en un medio de fermentación de azúcar para la prueba de fermentación de azúcar y se convertirá en un medio de identificación; Si se aumenta la dosis de cloruro de sodio en el agua de peptona al 1% y el pH se eleva a aproximadamente 8,6, se convertirá en agua de peptona alcalina para el cultivo de enriquecimiento de Vibrio cholerae y se convertirá en un medio de enriquecimiento especial.
2. Los medios nutritivos agregan algunos nutrientes especiales, como glucosa, sangre, suero, extracto de levadura, factores de crecimiento, etc. al medio de cultivo básico, para que las bacterias con altos requerimientos nutricionales puedan crecer en él. Streptococcus pneumoniae, etc. necesitan crecer en un medio que contenga sangre o suero; Al medio de cultivo de Mycobacterium tuberculosis hay que añadir huevos, patatas, glicerina, etc. El medio nutritivo más utilizado es la placa de agar sangre.
3. El medio de enriquecimiento es generalmente un medio líquido, que se utiliza para el cultivo de bacterias de enriquecimiento. Puede ser utilizado ampliamente o especialmente. Los medios de enriquecimiento especiales a menudo contienen nutrientes especiales o factores de crecimiento requeridos por el crecimiento de las bacterias objetivo.
4. Medios selectivos: los medios selectivos contienen nutrientes (bactericidas) y agentes bacteriostáticos (selectores). Después de inocular la muestra en dichos medios, las bacterias no diana se inhiben en diversos grados debido a la inhibición selectiva de los agentes bacteriostáticos, que conduce más a la proliferación o separación de las bacterias diana. La tasa de detección positiva de la bacteria objetivo se puede mejorar utilizando el medio selectivo durante un cierto período de tiempo y luego inoculándolo en el medio de identificación selectiva. Hay muchos tipos de agentes bacteriostáticos, como el verde de malaquita, el verde brillante, el selenito de sodio, el desoxicolato de sodio, la sal biliar, el sulfonato de tetrasulfuro de sodio y varios antibióticos. La cantidad de adición de agentes bacteriostáticos debe ser adecuada y precisa. Algunos son altamente tóxicos y otros no son resistentes a la fiebre alta. Se debe prestar especial atención a la preparación.
5. El medio diferencial es un sustrato de reacción e indicador que se agrega al medio de cultivo para distinguir las características de ciertos microorganismos e identificarlos. Se puede dividir en medio de identificación general y medio de identificación selectiva. El medio que solo se utiliza para distinguir diferentes especies microbianas se denomina medio de identificación general. Generalmente, este tipo de medio no agrega agentes bacteriostáticos sino que solo contiene indicadores, como el medio de bisacárido de hierro de Kirschner, que contiene glucosa y lactosa. El rojo de fenol se utiliza como indicador para observar el cambio de color del sustrato de cultivo y la superficie inclinada para determinar la capacidad de fermentación de las bacterias a glucosa y lactosa. Agregar citrato de amonio férrico, Después del cultivo, observe si hay una deposición negra para determinar si las bacterias descomponen los aminoácidos que contienen azufre en la peptona para producir sulfuro de hidrógeno; Otro ejemplo es el agar eosina azul de metileno, que contiene lactosa (sustrato de reacción) y eosina azul de metileno (indicador) para identificar Escherichia coli, bacterias patógenas intestinales y otras bacterias misceláneas. El medio de identificación general se caracteriza por contener indicadores en la fórmula y puede ser utilizado para distinguir diferentes tipos de microorganismos. Algunos medios de identificación también se pueden usar según las necesidades especiales de las bacterias para aislar y cultivar ciertas bacterias, como el agar triptona de soja y el agar sangre de color chocolate. que contiene lactosa (sustrato de reacción) y eosina azul de metileno (indicador) para identificar Escherichia coli, bacterias patógenas intestinales y otras bacterias misceláneas. El medio de identificación general se caracteriza por contener indicadores en la fórmula y puede ser utilizado para distinguir diferentes tipos de microorganismos. Algunos medios de identificación también se pueden usar según las necesidades especiales de las bacterias para aislar y cultivar ciertas bacterias, como el agar triptona de soja y el agar sangre de color chocolate. que contiene lactosa (sustrato de reacción) y eosina azul de metileno (indicador) para identificar Escherichia coli, bacterias patógenas intestinales y otras bacterias misceláneas. El medio de identificación general se caracteriza por contener indicadores en la fórmula y puede ser utilizado para distinguir diferentes tipos de microorganismos. Algunos medios de identificación también se pueden usar según las necesidades especiales de las bacterias para aislar y cultivar ciertas bacterias, como el agar triptona de soja y el agar sangre de color chocolate.
Algunos inhibidores e indicadores se agregan al medio de cultivo para inhibir el crecimiento de algunas bacterias, promover la propagación de las bacterias objetivo y hacer que las colonias bacterianas en crecimiento tengan ciertas características para facilitar la identificación y la selección. Este tipo de medio de cultivo se denomina medio de identificación selectiva. Por ejemplo, SS Agar contiene lactosa (sustrato de reacción), rojo neutro, citrato de amonio férrico (indicador), verde brillante y sales biliares (agente bacteriostático) en la fórmula del medio. Los agentes bacteriostáticos como el verde brillante y la sal biliar pueden inhibir el crecimiento de bacterias Gram-positivas y algunas Escherichia coli, pero no tienen efecto sobre Salmonella y Shigella. Además, Escherichia coli puede fermentar la lactosa para producir ácido, haciendo que las colonias se vuelvan rojas. Salmonella y Shigella no fermentan la lactosa, y sus colonias son incoloras. Si la bacteria produce sulfuro de hidrógeno, reaccionará con el citrato de amonio férrico para formar una precipitación de sulfuro ferroso y el centro de la colonia será negro o marrón. Para lograr el propósito de identificación.
En los últimos años, se ha desarrollado un medio de desarrollo de color especial para algunas bacterias en el país y en el extranjero mediante el uso de enzimas específicas de algunas bacterias y la selección de los sustratos correspondientes. Se ha utilizado para el aislamiento e identificación de bacterias, y ha obtenido buenos resultados. Este medio de desarrollo de color es en realidad también el medio de identificación. El principio básico es agregar la combinación de cromógeno (o fluorógeno) y sustrato de acción bacteriana al medio de cultivo, y cuando las bacterias contengan las enzimas correspondientes, la combinación se descompondrá para desarrollar color (o mostrar fluorescencia). Por ejemplo, el conjugado de cromógeno y glucósido se descompone bajo la acción de la glucosidasa para separar el glucósido del cromógeno y mostrar el color; Los conjugados de aminoácidos fluorescentes (sin fluorescencia) muestran fluorescencia al separar los aminoácidos de las sustancias fluorescentes bajo la acción de la aminopeptidasa. Los cromógenos comunes para el desarrollo del color son: α-naftol β-naftol, o-nitrofenol, p-nitrofenol, p-nitroanilina, fenolftaleína, 2-amino, 4-nitrobenceno, etc.; Los fluoróforos de uso común incluyen 4-metilumbeliferona (también conocida como 7-hidroxi-4-metilcumarina), etc. Actualmente, el medio de desarrollo de color se ha utilizado para el aislamiento, identificación y cultivo de una variedad de bacterias u hongos, como Salmonella, Escherichia coli, Listeria, Bifidobacterium, Lactobacillus, Candida albicans y otros medios de desarrollo de color. α-naftol β-naftol, o-nitrofenol, p-nitrofenol, p-nitroanilina, fenolftaleína, 2-amino, 4-nitrobenceno, etc.; Los fluoróforos de uso común incluyen 4-metilumbeliferona (también conocida como 7-hidroxi-4-metilcumarina), etc. Actualmente, el medio de desarrollo de color se ha utilizado para el aislamiento, identificación y cultivo de una variedad de bacterias u hongos, como Salmonella, Escherichia coli, Listeria, Bifidobacterium, Lactobacillus, Candida albicans y otros medios de desarrollo de color. α-naftol β-naftol, o-nitrofenol, p-nitrofenol, p-nitroanilina, fenolftaleína, 2-amino, 4-nitrobenceno, etc.; Los fluoróforos de uso común incluyen 4-metilumbeliferona (también conocida como 7-hidroxi-4-metilcumarina), etc. Actualmente, el medio de desarrollo de color se ha utilizado para el aislamiento, identificación y cultivo de una variedad de bacterias u hongos, como Salmonella, Escherichia coli, Listeria, Bifidobacterium, Lactobacillus, Candida albicans y otros medios de desarrollo de color.
También hay algunos medios de identificación que usan varios sistemas enzimáticos exclusivos de las bacterias para descomponer y utilizar varios azúcares, alcoholes, aminoácidos u otros sustratos específicos para producir ácidos, gases, álcalis u otras sustancias visibles, a fin de identificar bacterias, como comúnmente medios bioquímicos utilizados.
El medio de cultivo utilizado para el ensayo de características bioquímicas de bacterias se caracteriza por la adición de un sustrato específico al medio de cultivo básico sin azúcar y la adición de un indicador. Una serie de resultados de reacciones bioquímicas de bacterias en dicho medio de cultivo finalmente se muestran a través del indicador. Este tipo de medio es medio de identificación de reacción bioquímica. Según la dosis, se puede dividir en medio bioquímico principal y medio bioquímico menor. Vale la pena señalar que algunos componentes del medio de prueba bioquímico se ven afectados por muchos factores, como la alta temperatura y el pH. al preparar y usar, debe controlarse estrictamente de acuerdo con la situación real para evitar que los componentes efectivos se dañen, a fin de garantizar su efecto de uso.
6. Los medios anaeróbicos son un medio para el aislamiento, cultivo e identificación de bacterias anaeróbicas, que se denominan medios anaeróbicos. Debido a la falta de varias enzimas necesarias para el metabolismo aeróbico, como el citocromo y la citocromo oxidasa, la catalasa y la peroxidasa, y la superóxido dismutasa, los anaerobios no pueden llevar a cabo el metabolismo aeróbico debido a sus propios defectos metabólicos, y la energía generada por la fermentación anaeróbica es insuficiente. Por lo tanto, los anaerobios no pueden crecer y sobrevivir en un entorno atmosférico normal. Para permitir que las bacterias anaerobias crezcan normalmente, es necesario preparar un medio especial rico en nutrientes, bajo potencial redox y factores de crecimiento especiales.
El medio de cultivo anaeróbico generalmente se prepara a partir de extractos de corazón, cerebro u otros órganos, y con frecuencia es necesario agregar tioglicolato de sodio, cisteína, residuos de carne, hierro reducido, carbón activado y otros agentes reductores o materiales desoxidantes. Para observar el contenido de oxígeno del medio de cultivo, también se puede añadir azurol o azul de metileno al medio de cultivo líquido como indicador redox. El corazón, el extracto de cerebro, la masa de hígado y los residuos de carne contienen ácidos grasos insaturados, que pueden absorber oxígeno en el medio de cultivo. El tioglicolato de sodio y la cisteína son agentes reductores fuertes, que pueden consumir el oxígeno disuelto en el medio de cultivo. El carbón activado seco y el algodón absorbente también pueden absorber oxígeno en el medio de cultivo. Por lo tanto, el propósito de agregar agente reductor y material absorbente al medio de cultivo es crear un ambiente anóxico del medio de cultivo y mantener un potencial redox bajo. Además, se puede añadir una capa de parafina líquida sobre la superficie del medio de cultivo para aislar el contacto entre el medio de cultivo y la atmósfera.
7. Líquido de cultivo celular (LCL) se refiere al líquido utilizado para cultivar, conservar y transportar tejidos vivos, órganos y células in vitro para diversos fines. En esencia, es un entorno de nutrientes que simula artificialmente el crecimiento in vivo, de modo que las células puedan crecer y reproducirse en este entorno. Debido a que el número de sus componentes es claro y puede observar varios cambios biológicos del objeto estudiado mediante la regulación de un determinado componente, es ampliamente utilizado en la investigación de la biología celular. Los componentes de la solución de cultivo celular incluyen principalmente agua, aminoácidos, vitaminas, carbohidratos, iones inorgánicos, factores de crecimiento, etc. Estos componentes deben seleccionarse y probarse estrictamente antes de que puedan usarse. El agua utilizada debe cumplir con los requisitos del agua de prueba de grado 2 (CB / T 6682-1992).