El cultivo de células animales y su desarrollo tecnológico en la producción de vacunas virales
La vacuna es un agente inmunitario automático para la prevención de enfermedades infecciosas, que se compone de microorganismos patógenos (como bacterias, virus, etc.) y sus metabolitos mediante reducción, inactivación o ingeniería genética de virus artificiales. De acuerdo con los diferentes tipos de patógenos de enfermedades infecciosas que previene, se puede dividir aproximadamente en vacunas bacterianas y vacunas virales. Muchas vacunas virales utilizadas en la población ahora necesitan prepararse a través del proceso de cultivo, purificación, concentración, inactivación o lisis del virus. Debido a que los virosomas son un tipo de microorganismos parásitos especializados en células huésped, su reproducción debe llevarse a cabo en sus células huésped específicas. Por lo tanto,
1 proceso general de cultivo de células animales
El cultivo de células animales se refiere al cultivo de poblaciones de células animales vivas in vitro. En la actualidad, muchos campos de la biotecnología utilizarán esta tecnología. Especialmente en el campo de la medicina, el cultivo celular tiene un papel y un valor especial. Por ejemplo, muchas vacunas o medicamentos genéticamente modificados se obtienen a través del cultivo celular en el proceso de investigación y producción. Los instrumentos y equipos de uso común para el cultivo de células animales incluyen una sala aséptica, un banco de trabajo ultralimpio, un refrigerador de baja temperatura, un medidor de pH, un esterilizador de vapor a presión, una incubadora electrotérmica a temperatura constante, un aparato de cultivo, una incubadora de CO2, una olla de baño de agua a temperatura constante, un microscopio invertido y una centrífuga. , filtro estéril, dispositivo de lavado, tablero de conteo de células e instrumento de tecnología celular electrónica, etc. El equipo de automatización de cultivo celular cfam de Shenyang GREAT ELITES Intelligent Equipment Co., Ltd. puede realizar el cultivo duplicado de células y la limpieza puede alcanzar un nivel de limpieza de clase GMP. Es adecuado para empresas que necesitan una gran cantidad de células cultivadas. El cultivo celular se puede dividir en cultivo celular primario y cultivo celular de subcultivo.
1.1 cultivo celular primario
El cultivo celular primario es un proceso en el que varios tejidos del cuerpo del animal se extraen del cuerpo, se tratan con varias enzimas (comúnmente utilizada tripsina), agentes quelantes (comúnmente utilizado EDTA) o métodos mecánicos, se dispersan en células individuales y se cultivan en un medio adecuado, para que las células puedan sobrevivir, crecer y reproducirse.
Sin embargo, también existen algunos defectos en el cultivo de células primarias, como posibles factores exógenos, falta de verificación de la estandarización por adelantado y grandes diferencias entre lotes debido a la influencia de la edad del donante y el estado de salud. Por lo tanto, el uso de células de paso estables para cultivar estos virus en lugar de células primarias se ha convertido en la dirección de desarrollo futuro.
1.2 subcultivo cultivo celular
En el subcultivo, cuando el cultivo primario tiene éxito, con la extensión del tiempo de cultivo y la división continua de las células, se produce la inhibición del contacto debido al contacto entre las células y la tasa de crecimiento se ralentiza o incluso se detiene; Por otro lado, también será perjudicial para el crecimiento o intoxicación por insuficiencia de nutrientes y acumulación de metabolitos. En este momento, es necesario dividir el cultivo en partes pequeñas e inocularlas en otro recipiente de cultivo (botella) para cultivo. Este proceso se llama subcultura o re cultura. Para el cultivo en monocapa, el 80 % de células confluentes o recién confluentes son la etapa de subcultivo ideal. El cultivo celular de subcultivo en la producción de vacunas se refiere al proceso de cultivar líneas celulares estables, extraer las líneas celulares crioconservadas designadas para la producción y cultivarlas después de la reanimación celular.