Factores ambientales del cultivo celular
Factores ambientales del cultivo celular
1. Ambiente estéril
La no toxicidad y la esterilidad son las condiciones principales para el cultivo celular in vitro. In vivo, el sistema de desintoxicación y el sistema inmunitario de las células pueden resistir la invasión de microorganismos u otras sustancias dañinas. Sin embargo, en el proceso de cultivo in vitro, las células carecen de la protección del sistema inmunitario del organismo y pierden la capacidad de defenderse de los microorganismos y desintoxicarse de sustancias nocivas. Para asegurar que las células puedan crecer y reproducirse in vitro, es necesario asegurar áreas de trabajo estériles, buena higiene personal, reactivos y medios de cultivo estériles y operaciones estériles.
La contaminación microbiana común incluye micoplasma, bacterias y hongos. El micoplasma no tiene toxicidad letal, puede coexistir con las células durante mucho tiempo y tiene efectos potenciales en las células. Sin embargo, es pequeño y difícil de identificar. Se puede detectar mediante tinción de liquen rojo o hoechst33342. Las bacterias proliferan rápidamente y pueden expandirse en gran cantidad en poco tiempo y producir toxinas para matar las células. Hay muchos tipos de hongos, que se pueden ver a simple vista. Flotan en la superficie del líquido de cultivo y pueden ser filamentosos, tubulares o dendríticos.
2. Temperatura adecuada
En general, la temperatura adecuada para las células de mamíferos y aviares que se cultivan in vitro es 37-38 ℃, y la temperatura ambiental inapropiada afectará el crecimiento de las células. La tolerancia de la célula a baja temperatura es más fuerte que la de alta temperatura. A baja temperatura, la actividad metabólica de la célula y la capacidad de división nuclear disminuyen. Si la temperatura no es inferior a 0 ℃, el metabolismo celular se ve afectado, pero no hay daño; A 25 ~ 35 ℃, las células crecieron lentamente; Sin embargo, si se coloca a 40 ℃ durante varias horas, no favorece la supervivencia y el crecimiento de las células, e incluso puede provocar su muerte.
3. Presión osmótica adecuada
La solución hipertónica o la solución hipotónica pueden hacer que las células se arruinen, se hinchen y se rompan. Por lo tanto, la presión osmótica es una de las condiciones importantes para el cultivo celular in vitro. La mayoría de las células cultivadas in vitro tienen una cierta tolerancia a la presión osmótica. En la aplicación práctica, la presión osmótica de 260-320 mmol / L se puede aplicar a la mayoría de las células.
4. Medio ambiente de gas y pH
El cultivo in vitro de células requiere un ambiente gaseoso ideal, y el oxígeno y el dióxido de carbono son las condiciones necesarias para la supervivencia celular. El oxígeno participa en el ciclo de los ácidos tricarboxílicos de las células y proporciona energía para la supervivencia, el metabolismo y la síntesis de las células; El dióxido de carbono no es solo un producto metabólico de las células, sino también un componente esencial del crecimiento celular, y también está relacionado con el mantenimiento del pH del medio de cultivo. El rango de pH adecuado para la mayoría de las células suele ser de 7,2 a 7,4. En la cultura abierta, el 5% de dióxido de carbono fue el mejor.