Precauciones para el cultivo celular
Precauciones para el cultivo celular
(1) Al cultivar una determinada célula por primera vez, primero debe buscar el nombre de la célula para comprender la información relevante, incluido el medio de cultivo, el suero, los aditivos, el tiempo de digestión normal, el tiempo de paso, etc. Para células específicas (como como células cultivadas primarias), es necesario consultar la literatura relevante para obtener métodos de cultivo más precisos.
(2) Al ingresar al cultivo de célula a célula, se deben seguir estrictamente los siguientes pasos:
① Asegúrese de que todas las soluciones y consumibles para el funcionamiento de la celda se hayan desinfectado y probado sin problemas. No utilice soluciones y consumibles dudosos. No tome prestadas las soluciones de otras personas a menos que sea en circunstancias especiales.
② Asegúrese de que los puños de la ropa estén enrollados o que los puños de la bata blanca estén abrochados.
③ Determine la cantidad de alcohol en la lámpara de alcohol y rellénela si es necesario.
④ Asegúrese de que todas las soluciones y consumibles necesarios estén al alcance. Para abrir la tapa de la botella con una mano, todas las tapas de las botellas se pueden aflojar antes del experimento.
⑤ Trate de no verter la solución directamente a menos que la boca de la botella no esté quemada. Si el vertido falla y la solución se pega a la boca de la botella, limpie con cuidado la periferia de la boca de la botella con una toalla de papel rociada con alcohol al 75% (no toque la boca de la botella) y quémela en la boca. fuego.
⑥ Si no está seguro de que los consumibles utilizados estén limpios durante el funcionamiento, deben reemplazarse a tiempo.
⑦ Limpie a tiempo después del experimento, mantenga el área de trabajo limpia y ordenada y, finalmente, limpie la mesa con alcohol al 75%.
(3) Prevención de la contaminación celular
① Los suministros de laboratorio previenen la contaminación. Los reactivos, consumibles y equipos utilizados para el cultivo celular deben limpiarse y desinfectarse a fondo, y la esterilización de varias soluciones debe ser cuidadosa y solo puede usarse después de que la prueba de esterilidad sea negativa. El quirófano y el resto del equipo estéril se limpiarán, desinfectarán y esterilizarán con regularidad.
② Evitar la contaminación durante el funcionamiento.
③ La ropa que sea fácil de generar electricidad estática o absorber polvo debe ser reemplazada por batas blancas antes de ingresar a las celdas.
④ Antes del inicio del experimento, es necesario asegurarse de que no haya ningún problema con los guantes. Siempre que los guantes estén en contacto con objetos fuera del gabinete de bioseguridad, los guantes deben desinfectarse a tiempo.
⑤ Luego de ingresar a la sala de cultivo celular, cierre la puerta, siéntese y camine lo menos posible para no afectar la cortina de aire de la cabina de bioseguridad. Límpiese las manos y las tapas de las botellas con algodón con alcohol al 75 % antes de trabajar. Verifique estrictamente el equipo, las soluciones y las celdas utilizadas con anticipación. No traiga artículos contaminados o no esterilizados a la sala estéril, y mucho menos utilícelos casualmente, para evitar la contaminación a gran escala.
⑥ El funcionamiento de las celdas debe ser ligero. La boca de la botella debe abrirse en el área estéril alrededor de la llama, y la boca de la botella debe colocarse alrededor de la llama para que la rotación y la combustión sean simples. Tenga cuidado de no dejar que la llama queme la boca de la botella de plástico.
⑦ Durante la operación experimental, la partición del gabinete de bioseguridad debe ser lo más baja posible para minimizar la conversación. Al estornudar o toser, no debe mirar hacia el área de trabajo para evitar una contaminación innecesaria.
⑧ La tapa de la botella debe colocarse al revés para evitar que la tapa de la botella se contamine por un mal funcionamiento.
⑨ No pase por encima del contenedor abierto para evitar la contaminación celular causada por objetos desconocidos que caen sobre la ropa.
⑩ Durante la operación experimental, preste atención al reemplazo oportuno de la pipeta Pasteur, el cabezal de la pipeta y la pipeta, y no lleve una tubería hasta el final. En caso de contacto con artículos impuros o indeterminados, deben desecharse directamente. Después del experimento, se limpiará a tiempo para mantener el laboratorio limpio y ordenado. Finalmente, el tablero de la mesa se limpiará con alcohol al 75%.
(4) Prevenir la contaminación cruzada de las células.
① Al realizar una variedad de operaciones de cultivo celular, los instrumentos utilizados deben distinguirse estrictamente y es mejor marcarlos para su identificación. La operación se lleva a cabo en secuencia y solo se procesa una celda a la vez. Cuando se realizan juntas varias celdas y varias operaciones, es probable que se produzca confusión.
② Durante la operación de intercambio o paso de líquido, la cabeza de la pipeta y la pipeta adjunta con las células no deben tocar la boca de la botella de reactivo, para evitar llevar las células al medio de cultivo y contaminar otras células.
③ Una vez que todas las células se compran, se introducen de otros lugares o se establecen por sí mismas, deben conservarse y congelarse en el tiempo. En caso de contaminación, las células pueden resucitarse y seguir cultivándose.